使用音乐定音音叉调音时，首先选择440赫兹的A音音叉（国际标准音高），握住柄部轻敲膝盖或手掌侧边使其振动，然后将底座贴近吉他琴身或耳旁聆听。以第五弦空弦A音为基准，调整至与音叉共鸣，再依次校准其他弦：第五弦5品对应第四弦空弦D音，第四弦5品对应第三弦空弦G音，第三弦4品对应第二弦空弦B音，第二弦5品对应第一弦空弦高音E音，第六弦5品则与第五弦空弦A音同频。

音叉调音的原理基于物理学共振现象。当音叉振动频率与琴弦固有频率一致时，会产生最大振幅的声波叠加，此时琴弦与音叉发出和谐统一的音高。440赫兹作为国际通用标准音高，自1939年伦敦国际标准协会确立后沿用至今，其稳定性远超早期历史上浮动于380-480赫兹的定音标准。现代研究表明，该频率既能满足人耳对音色饱满度的需求，又不会对乐器结构造成过大张力。

专业调音流程中，音叉的优势体现在三个方面：首先是精度可靠，金属材质受温度影响较小，误差范围控制在±1赫兹内；其次是操作便携，无需电力支持即可在演出或练习中快速校音；最重要的是培养音乐人的绝对音感，通过反复聆听标准音高可强化听觉记忆。值得注意的是，调音时应保持环境安静，避免空调、电器等背景噪音干扰，同时敲击力度需适中——过猛会导致泛音失真，过轻则缩短振动持续时间。

对于吉他各弦的定音关系，其科学依据源于十二平均律。六根弦的空弦音EADGBE（从低音到高音）构成四度-四度-四度-大三度-四度的音程结构，这种排列既保证和弦按指法的规律性，又使音域覆盖三个八度。例如第五弦（A音）与第四弦（D音）纯四度相差5个半音，而第二弦（B音）与第三弦（G音）大三度相差4个半音的特殊设置，正是为了解决高音区指法衔接问题。通过音叉定准基准音后，其余弦音均可依据这种数理关系推导校准。

在实际应用中，音叉调音存在两个技术要点：其一是泛音辨识技巧，熟练者可通过轻触琴弦特定品位的泛音点（如12品）与音叉对比，这种方法能过滤掉干扰谐波；其二是余音处理，优质音叉持续振动约30秒，应在衰减至70%音量前完成比对。对于古典吉他，有时会采用降低全琴音高的"开声"调法，此时仍需以标准音叉为基准按比例下调，避免琴颈因张力失衡变形。